Alkali proteaz aktivitesinin saptanma yöntemi nedir?
Yöntemi nedir? Alkali Proteaz aktivite tespiti?
Enzim aktivitesi, bir enzimin belirli kimyasal reaksiyonları katalize etme yeteneğini ifade eder. Enzim aktivitesinin boyutu, ilgili koşullar altında katalize ettiği belirli bir kimyasal reaksiyonun hızıyla ifade edilebilir. Liaoning aktivitesinin ölçülmesiAlkali ProteazEnzim aslında enzim tarafından katalize edilen kimyasal reaksiyonun hızını ölçer. Enzimatik reaksiyonun hızı, reaksiyon substratının azalması veya birim zamanda ürünün artması ile ifade edilebilir. Hassasiyet adına, genellikle birim zamanda üretilen ürün miktarı ölçülür. Enzimatik reaksiyonun hızı, zaman içinde artış değerini kademeli olarak azaltabileceğinden, enzim aktivitesini doğru bir şekilde ölçmek için enzimatik reaksiyonun başlangıç hızı belirlenmelidir.
İlkeAlkali ProteazFolin Yönteminin Aktivite Belirleme Prensibi
Alkali Proteazkazeinin alkali koşullar altında tirozine hidrolizini katalize edebilir. Tirozin, fenolik bir hidroksil grubu içeren bir amino asittir ve Folin (fosfotungstik asit ve fosfomolibdik asit karışımı) ile reaksiyona girebilir. (Folin fenol reaksiyonu: Folin reaktifi alkali koşullar altında son derece kararsızdır ve fenolik bileşikler tarafından kantitatif olarak indirgenerek farklı bir mavi tonu gösteren tungsten mavisi ve molibden mavisi karışımı üretmek kolaydır.) Kolorimetri kullanılarak Yani, üretilen tirozin miktarı belirlenebilir ve Liaoning tarafından kazeinin hidrolizi ile üretilen tirozin miktarıAlkali ProteazBirim zamandaki birim sayısı enzim aktivitesini ifade etmek için kullanılır, böylece enzim aktivitesi hesaplanır.
Belirlenmesi için deneysel prosedürAlkali Proteazetkinlik
Enzim çözeltisi hazırlama: 1 g (±0,001) kuru enzim tozunu dikkatlice tartın, 10 mL tampon çözeltisi (2.2.5) ekleyin, küçük bir beherde çözün ve cam bir çubukla karıştırın. Bir süre bekledikten sonra, üst katman çözeltisini dikkatlice bir hacimsel şişeye dökün. Ortada, tortu kısmına az miktarda tampon çözeltisi ekleyin, bu şekilde 4 kez karıştırın ve çözün ve son olarak hepsini 100 mL'lik bir hacimsel şişeye aktarın. Tampon çözeltisi ile işarete kadar tamamlayın, iyice çalkalayın ve dört kat gazlı bezle süzün. Süzüntünün 5 mL'sini çekin, 100 mL'lik bir hacimsel şişeye aktarın, damıtılmış suyla işarete kadar seyreltin ve enzim sıvısını 2000 kat seviyesinde seyreltin.
TanımıAlkali Proteazetkinlik
TanımıAlkali Proteazaktivite birimi: 1 gramAlkali ProteazToz, pH10 ve 40°C koşullarında dakikada 1 mikrogram tirozin üretebilmektedir ki bu da enzim aktivitesi birimi olarak kabul edilmektedir.
Belirlenmesine yönelik önlemlerAlkali Proteazetkinlik
1. Enzim reaksiyonunun sıcaklığı, pH'ı ve süresi hidrolize olan peptit bağlarının sayısını doğrudan etkilediğinden sıkı bir şekilde kontrol edilmelidir.
2. Reaksiyon trikloroasetik asit ile sonlandırıldıktan sonra reaksiyon karışımının filtrelenmesiyle elde edilen süzüntü berrak olmalıdır.
3. Folin reaktifi asidik ortama duyarlı olduğundan ve değişime meyilli olduğundan, ölçüm sırasındaki düzende bir şart vardır. Alkali bir ortam oluşturmak için sodyum karbonat çözeltisi eklemek ve ardından normal şekilde çalışmasını sağlamak için Folin reaktifi eklemek gerekir.
Yukarıda alkalin proteaz hakkında sizin için paylaştığım ilgili makaleler yer almaktadır. Eğer diğer ilgili makaleleri bilmek istiyorsanızAlkali Proteaz, lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin.
