Alkalin proteaz aktivite tespiti yöntemi nedir?
Alkalin proteaz aktivite tespiti yöntemi nedir?
Enzim aktivitesi, bir enzimin belirli kimyasal reaksiyonları katalize etme yeteneğini ifade eder. Enzim aktivitesinin boyutu, karşılık gelen koşullar altında katalize ettiği belirli bir kimyasal reaksiyonun hızı ile ifade edilebilir. Liaoning alkalin proteaz enziminin aktivitesinin ölçülmesi aslında enzim tarafından katalize edilen kimyasal reaksiyonun hızını ölçmektedir. Enzimatik reaksiyonun hızı, reaksiyon substratının azalması veya ürünün birim zaman başına artması ile ifade edilebilir. Hassasiyet uğruna, birim zamanda üretilen ürün miktarı genellikle ölçülür. Enzimatik reaksiyonun hızı zaman içinde artış değerini kademeli olarak azaltabileceğinden, enzim aktivitesini doğru bir şekilde ölçmek için enzimatik reaksiyonun başlangıç hızı belirlenmelidir.
Alkalin Proteaz Aktivitesi Tayin Prensibi Folin Metodu Prensibi
Alkalin proteaz, alkalin koşullar altında kazeinin tirosine hidrolizini katalize edebilir. Tirozin, fenolik bir hidroksil grubu içeren bir amino asittir ve Folin (bir fosfotungstik asit ve fosfomolibdik asit karışımı) ile reaksiyona girebilir. (Folin fenol reaksiyonu: Folin reaktifi alkalin koşullar altında son derece kararsızdır ve farklı bir mavi tonu gösteren tungsten mavisi ve molibden mavisi karışımı üretmek için fenolik bileşikler tarafından kantitatif olarak azaltılması kolaydır.) üretilen tirozin miktarı belirlenebilir ve bir birim zamanda Liaoning alkalin proteazı ile kazeinin hidrolizi ile üretilen tirozin miktarı, enzim aktivitesini ifade etmek için kullanılır, böylece enzim aktivitesini hesaplar.
Alkalin proteaz aktivitesinin belirlenmesi için deneysel prosedür
Enzim çözeltisi preparasyonu: 1 g (± 0.001) kuru enzim tozunu doğru bir şekilde tartın, 10 mL tampon çözeltisi (2.2.5) ekleyin, küçük bir beher içinde eritin ve bir cam çubukla karıştırın. Bir süre bekledikten sonra, üst tabaka solüsyonunu hacimsel bir şişeye dikkatlice dökün Ortada, tortu kısmına az miktarda tampon solüsyonu ekleyin, bu şekilde 4 kez karıştırın ve çözün ve sonunda hepsini 100 mL hacimli bir şişeye aktarın. . Tampon çözeltisi ile işarete kadar tamamlayın, iyice çalkalayın ve dört kat gazlı bezle süzün. 5 mL süzüntü çizin, 100 mL hacimli bir şişeye aktarın, damıtılmış suyla işarete seyreltin ve enzim sıvısını 2000 kat seviyesinde seyreltin.
Alkalin proteaz aktivitesinin tanımı
Alkalin proteaz aktivite biriminin tanımı: 1 gram alkalin proteaz tozu, bir enzim aktivite birimi olarak kabul edilen pH10 ve 40 ° C koşulları altında dakikada 1 mikrogram tirozin üretebilir.
Alkalin proteaz aktivitesinin belirlenmesi için önlemler
1. Enzim reaksiyonunun sıcaklığı, pH'ı ve süresi, hidrolize edilmiş peptit bağlarının sayısı üzerinde doğrudan bir etkiye sahiptir, bu nedenle sıkı bir şekilde kontrol edilmelidir.
2. Reaksiyonun trikloroasetik asit ile sonlandırılmasından sonra, reaksiyon karışımının filtrelenmesiyle elde edilen filtrat berrak olmalıdır.
3. Folin reaktifi asidik ortama duyarlı olduğundan ve değişmeye eğilimli olduğundan, ölçüm sırasında sırayla bir şart vardır. Alkali bir ortam oluşturmak için sodyum karbonat çözeltisinin eklenmesi ve daha sonra normal şekilde çalışması için Folin reaktifinin eklenmesi gerekir.
Yukarıda sizin için paylaştığım alkalin proteaz ile ilgili makaleler. Alkalin proteaz ile ilgili diğer makaleleri öğrenmek isterseniz, lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin.
